遇到編碼微球吸附熒光檢測抗體怎么辦

    您在開發(fā)流式聯(lián)檢試劑時是否遇到過這樣的問題，某個指標(biāo)，即使在標(biāo)準(zhǔn)品為0時，PE檢測通道也有很高的熒光值。這是什么原因了? 根據(jù)我們在實踐中的經(jīng)驗，這主要是由于該對抗體中，用于檢測的熒光抗體與聚苯乙烯微球表面具有比較強的非特異性吸附，從而導(dǎo)致背景信號較高。而這種高的背景信號往往嚴(yán)重影響了檢測的靈敏度以及低值樣本檢測的準(zhǔn)確度。

   為了降低微球表面吸附，碧芯生物將熒光編碼微球經(jīng)過特殊工藝處理，顯著的減少了對熒光檢測抗體的非特異性吸附。這樣的低吸附微球構(gòu)建的檢測試劑能否帶來更好的檢測性能? 事實勝過雄辯，我們將用實驗結(jié)果來證明。在本次實驗中，我們選用了一對非特異性吸附較強的IL-10的抗體對作為我們的研究對象，比較普通熒光編碼微球（源于碧芯生物和其它競品公司）與低吸附熒光編碼微球（碧芯生物）構(gòu)建的檢測試劑在檢測性能上的差異。為了保證實驗條件一致，我們將各自偶聯(lián)了捕獲抗體的低吸附微球和普通微球混合在一起進(jìn)行檢測。

  首先，我們先測定了IL-10濃度為0時，微球與PE標(biāo)記的IL-10檢測抗體共孵育、最終用清洗液清洗后，不同微球的熒光信號值（背景熒光信號）。如表1所示，Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球PE熒光僅為113，相較于沒有與檢測抗體孵育的微球熒光值105，僅僅增加了8（噪音值）。競品公司1和碧芯生物普通熒光編碼微球，其噪音熒光值是Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球的250倍以上。其中最讓人驚訝的競品公司2的熒光編碼微球，其熒光值達(dá)到了90397，這意味著大量的檢測熒光抗體被直接吸附到了微球的表面。

                                              表1 在各種微球構(gòu)建的IL10的檢測體系中，IL10濃度為0時的信號值如下表所示

  我們進(jìn)一步制備各種微球構(gòu)建的IL10試劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線。除了做標(biāo)準(zhǔn)曲線以外，也對血清樣本及血清加標(biāo)樣本進(jìn)行了檢測（Test001和Test004為同一管血清的重復(fù)樣本；Test002和Test003分別為Test005和Test006血清樣本的加標(biāo)樣本）。首先我們測試的是碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑。如圖1所示，Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑在對照品濃度（2.29 pg/mL）仍然能準(zhǔn)確檢出，健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測結(jié)果準(zhǔn)確。

     圖1 碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑檢測人血清的研究結(jié)果

  接下來，我們分別考察了來自于碧芯生物和其它競品公司普通熒光編碼微球構(gòu)建的IL10檢測試劑的檢測性能。如圖2所示，采用碧芯生物Beadstar-mPlex®普通熒光編碼微球構(gòu)建的檢測試劑，標(biāo)準(zhǔn)曲線中對照品濃度需大于200 pg/mL才能準(zhǔn)確檢出；健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測結(jié)果為0，結(jié)果不準(zhǔn)確。 圖3所示結(jié)果來自競品公司1的普通熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線中對照品濃度需大于700 pg/mL才能準(zhǔn)確檢出；健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測結(jié)果為0，結(jié)果不準(zhǔn)確。

                                     圖2 碧芯生物Beadstar-mPlex®普通磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑檢測人血清的研究結(jié)果

                                                          圖3 競品公司1熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑檢測人血清的研究結(jié)果

  在前面表1中，非特異性吸附最為嚴(yán)重的競品公司2熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑檢測人血清的研究結(jié)果如圖4所示。來自于該公司的普通熒光編碼微球做不出標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測不出人血清樣本及血清加標(biāo)樣本。

                                                         圖4 競品公司2熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測試劑檢測人血清的研究結(jié)果

總結(jié)：從結(jié)果中可以看出，如果采用普通熒光編碼微球，對于這一對IL-10抗體有著非常高的背景值，這主要是由于普通微球?qū)?/span>IL-10熒光檢測抗體的非特異性吸附較高導(dǎo)致的。采用碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球的背景值非常低。因而如果想利用這對抗體做出理想的IL-10檢測試劑，只有碧芯生物低吸附磁性熒光編碼微球才能實現(xiàn)。當(dāng)然，更換抗體對可能會有更好的結(jié)果，但這種方法不具有普適性，因為不是所有的項目都有多對抗體對可供選擇。因此，選擇低吸附熒光編碼微球來構(gòu)建檢測試劑才是解決這一問題的理想方法。

這樣的結(jié)果也提示我們，熒光值高的不一定是檢測效果好，也有可能是噪音高。